HPLC: o que é qual sua função?

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hplc

HPLC é a sigla em inglês para a cromatografia líquida de alta eficiência: High Performance Liquid Chromatography. Trata-se de um tipo de cromatografia em coluna.

A cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) é um método utilizado para a separação de compostos químicos em solução.  É utilizada com a finalidade de identificar os componentes de uma mistura, quantificar e purificá-los.

A técnica funciona pelo bombeamento de um solvente líquido pressurizado, que contém uma mistura que passa por uma coluna HPLC preenchida com algum tipo de material sorvente (material sólido que possui grande área superficial, na maioria das vezes poroso, que é capaz de absorver ou adsorver os analitos em sua superfície). 

Em contato com esse material sorvente, cada amostra interage de uma maneira e gerando velocidades diferentes e promovendo a separação, conforme percorrem a coluna. 

Aplicação de HPLC

HPLC é aplicado em análises em que a cromatografia gasosa não pode ser utilizada, como as de compostos não voláteis ou instáveis termicamente. 

Muitos dos compostos apresentam essas características (cerca de 80%), por isso o campo do HPLC é bastante amplo, sobretudo na área farmacêutica, em que é necessário quantificar os insumos farmacêuticos, fazer o doseamento de impurezas e de produtos de degradação em matérias-primas e produtos acabados.

Na HPLC o sucesso da separação cromatográfica somente é possível se for aplicada uma fase móvel (FM) correta a uma fase estacionária (FE) conveniente.

Alguns componentes do cromatógrafo líquido

De forma geral se tem as seguintes partes no cromatógrafo líquido:

  • Reservatório da FM: é um recipiente que contém a fase móvel que será bombeada para dentro do equipamento;
  • Bomba: sistema de bombear para que a fase móvel migre com vazão constante pela fase estacionária;
  • Injetor: onde é realizada a injeção da amostra no sistema com exatidão e precisão adequada;
  • Coluna cromatográfica: onde está a fase estacionária, em que acontece a separação; a coluna cromatográfica é feita de um material inerte que resiste a todas as pressões em que ela vai ser usada. A capacidade da coluna é determinada pelo comprimento, diâmetro e pelo material de recheio.
  • Detector: dispositivo conectado na saída da coluna e que emite um sinal elétrico, no qual é registrado continuamente a composição do eluente e que gera um cromatograma.

Por que a HPLC é importante?

A HPLC, devido à sua alta precisão, é um dos métodos mais eficientes na separação de compostos químicos. Por meio desse método se pode atestar que não há falhas em nenhuma fase dos processos. 

Vantagens do método HPLC

Entre as principais vantagens desse método, podemos citar:

  • precisão na identificação dos componentes;
  • mais rapidez e eficiência nos processos;
  • tempo de análise reduzido;
  • alta resolução;
  • identificação de substâncias usando mínimas quantidades de amostras.

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