A cromatografia é uma técnica analítica de separação de misturas complexas que está presente em diversas áreas tecnológicas.
Existem diferentes tipos de cromatografia, no entanto, a fundamentação de todos os tipos é a mesma: é uma técnica de separação baseada na migração dos compostos a partir da interação desses compostos com duas fases que estão presentes no sistema cromatográfico: a fase móvel e a fase estacionária.
A cromatografia líquida está dentre os tipos de cromatografia existentes e, assim como a cromatografia gasosa, é a técnica que mais se destaca por apresentar (quando empregado um sistema de alta eficiência) boas respostas analíticas, com adequada precisão, exatidão, sensibilidade e resolução.
Quando falamos em alta eficiência, falamos em HPLC e UHPLC — e neste momento, vamos abordar as vantagens e desvantagens dessa aplicação.
Que tal saber? Continue a leitura!
As técnicas HPLC e UHPLC
A cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC – do inglês: High Performance Liquid Chromatography) é uma técnica analítica que emprega bombas de alta pressão para que a fase móvel percorra por todo o sistema cromatográfico e assim carregue a amostra até a fase estacionária, onde irá interagir com o material presente na coluna cromatográfica e assim ficará retido por determinado tempo.
A cromatografia líquida de ultra eficiência (UHPLC – do inglês: Ultra-High Performance Liquid Chromatography) surgiu a partir da produção de colunas cromatográficas que possuíam a fase estacionária com porosidade menor ou igual a 2 µm, objetivando respostas mais rápidas e eficientes do que já se era capaz de obter com HPLC.
A fundamentação do UHPLC é a mesma que o HPLC, possuindo apenas como diferenças o tipo de coluna cromatografia a ser empregada em cada sistema, a qual junto com a alta velocidade proveniente da fase móvel proporcionam uma maior resolução e detectabilidade dos analitos de interesse e assim diminuindo o tempo de análise.
O papel das colunas cromatográficas
As colunas cromatográficas desenvolvem papel fundamental no sistema cromatográfico, possuindo diversos tipos de enchimento, tamanho, diâmetro, e tamanho dos poros das partículas que fazem o enchimento desta coluna.
O principal recheio das colunas é a sílica, devido a diversas propriedades que fazem o seu uso adequado; esta sílica pode ainda estar ligada a uma cadeia carbônica, seja de 4, 8 ou até mesmo 18 carbonos, tendo como resultado uma diminuição na característica polar desta coluna conforme o aumento no número de carbonos.
No entanto, existem outros tipos de enchimentos, como as colunas CN e as de fenil. As colunas empregadas em um sistema HPLC possuem poros numa faixa de 6 – 12 µm. Como citado anteriormente, as colunas de UHPLC foram desenvolvidas a partir de recheios com partículas de poros de 2 µm ou ainda menores.
Quais são as vantagens em utilizar o sistema HPLC e UHPLC?
- Sensibilidade: apesar da quantidade de amostra injetada no sistema cromatográfico ser mínima, esta técnica possui a capacidade de separar e detectar substâncias mesmo em concentrações muito pequenas, principalmente se selecionado e empregado um detectador adequado. Existem detectores que podem detectar amostras em concentrações de nano e até mesmo em picogramas;
- Alta resolução: o sistema cromatográfico sendo selecionado adequadamente é possível identificar diversos compostos que podem estar presentes em uma única amostra, desde que o método tenha sido desenvolvido e validado de forma correta;
- Automatização: é possível configurar, a partir do software, quando o equipamento deve injetar uma amostra e ainda você pode acompanhar esta corrida cromatográfica em tempo real. O software também permite que você crie uma “lista de espera” quando várias amostras devem ser analisadas. O que significa? Que você cria um batch processing e assim o equipamento vai injetar todas as amostras, uma de cada, sem a necessidade do operar iniciar cada corrida de forma manual;
- O sistema UHPLC, no entanto, apresenta um “plus” nestas características, já que por se tratar um equipamento ultra, ele vai apresentar uma maior velocidade na aquisição de resultados, o que consequentemente leva a um maior rendimento; vai fornecer uma maior resolução dos picos nos cromatogramas e vai aguentar pressões mais altas que quando comparado com HPLC.
As desvantagens dessas técnicas
- Instrumentação de alto custo: tanto HPLC quanto UHPLC são equipamentos que possuem um preço de aquisição alto, por isso, é necessário avaliar se a demanda de seu laboratório compensa o investimento na compra;
- Alto custo de operação: uma grande quantidade de solventes e reagentes são utilizados em análises cromatográficas, principalmente na área de controle de qualidade de medicamentos da indústria farmacêutica, visto que há a necessidade de o equipamento estar em uso diariamente;
- Experiência de manuseio: apesar de ser simples o manuseio de um HPLC e de um UHPLC, é necessário que o operador possua conhecimentos teóricos tanto do equipamento quanto da fundamentação da técnica, já que toda a análise requer finos ajustes, e ainda, o desenvolvimento de um novo método cromatográfico exige conhecimento tanto da técnica quanto das características físico-químicas do analito a ser estudado;
- Instrumentação UHPLC: além do alto custo dos equipamentos, o qual é maior quando se trata de UHPLC, esta técnica necessita de instrumentos específicos para o emprego de uma fase estacionária que possua tamanho de poro menor que 2 µm e ainda há a tendência de consumir mais solventes que quando comparado com HPLC.
Esperamos que tenham gostado de nosso conteúdo!
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