O que é CLAE? Para que é utilizada e o que essa técnica envolve? É uma tecnologia nova? Tantos assuntos para falarmos!
Primeiro, uma curiosidade: você sabe que quem é fã de programas de televisão que envolvem o universo policial e forense, como Law and Order, CSI e CSI Miami, por exemplo, já pode ter visto os especialistas usando a técnica em laboratórios criminais para obter evidências de crimes?
Pois é! Não é à toa que tem “alta eficiência” no nome: CLAE significa Cromatografia Líquida de Alta Eficiência, e é amplamente usada nas indústrias farmacêuticas e e alimentos, por exemplo.
Abordamos mais sobre o tema neste post de hoje. Acompanhe!
O que é CLAE?
CLAE é uma técnica analítica usada para separar, identificar e quantificar cada um dos componentes numa mistura. A tecnologia surgiu na década de 60, como uma forma de produzir e utilizar recheios com diâmetros de partículas tão pequenos como 3 a 10 µm.
A CLAE trata de uma separação que tem como fundamento a interação dos componentes de uma amostra, com duas fases, fase móvel (FM) e fase estacionária (FE), e que são imiscíveis entre elas.
Na fase estacionária podem ser utilizados compostos sólidos ou líquidos. A fase sólida, tais como, sílica, carvão ativo, etc., que se encontram empacotadas em uma coluna, a qual é atravessada pela fase móvel. Nesse caso a base para a separação de misturas é chamada de adsorção.
Já o composto líquido da fase estacionárias é denominado de película delgada, sendo que nesse caso a base de separação de misturas é denominado de partição.
Além destes dois tipos de separação mencionados, pode-se observar outros esquemas de separação. Segue ao lado uma figura exemplificando os mecanismos de separação na cromatografia.
Na fase móvel utiliza-se uma mistura de solventes, por exemplo, água ultrapura, acetonitrila e metanol, a mistura ou somente um solvente é o eluente. Algumas informações são pertinentes sobre a fase móvel:
- Os solventes devem ter alto grau de pureza,
- O eluente deve ter baixa viscosidade;
- A amostra deve ser solúvel na fase móvel;
- Polaridade adequada para a realização da separação dos componentes da amostra.
CLAE ou HPLC?
Para quem tem dúvidas sobre CLAE e HPLC, saiba que estamos falando da mesma coisa, da mesma técnica. A diferença é que CLAE denomina o nome em português, enquanto HPLC é a versão em inglês, e vem de High Performance Liquid Chromatography.
Agora, tire outras dúvidas em relação à CLAE.
Quais os tipos de colunas utilizados na CLAE?
A CLAE tem como princípio a técnica por coluna, ou seja, a FE é uma coluna, que permanece imóvel no cromatógrafo líquido de alta eficiência. A FM, por sua vez, é uma solução, composta por solventes adequados, que vão permitir com que a amostra seja carreada até a FE.
O analito da amostra deve apresentar interação com os dois tipos de fase. Ou seja, ela deve ter, tanto a capacidade de interagir com a FM, permitindo que ela seja transportada até a FE, quanto com a FE, possibilitando a sua interação com seus componentes.
Dessa forma, o analito da amostra fica retido por um período adequado, realizando a sua separação da mistura.
Quanto maior for a interação do analito com a FE, maior será o tempo de retenção.
Tipos de colunas
As colunas de cromatografia são classificadas em semipreparativas ou preparativas e as diferenças são:
- Colunas semipreparativas: que possuem até 60 cm e diâmetro interno de 4,6 a 10 mm, com partículas de diâmetro de 10 µm e são usualmente utilizadas para realizar a purificação do material eluido e são utilizados em cromatógrafos que permita fluxos de FM superior a 1 mL/min;
- Colunas preparativas: possuem tamanho de até 30 cm e diâmetro interno de 50 mm e são utilizadas para isolar e identificar um analito de interesse em escala maior do que os obtidos nas colunas semipreparativas.
Esperamos que tenha gostado deste conteúdo. E caso queira informações sobre colunas HPLC, fale com a Modum Tech!
